Ren Saposhnikovia divaricata olie til stearinlys- og sæbefremstilling engros diffuser æterisk olie ny til reed burner diffusers

kort beskrivelse:

 

2.1. Forberedelse af SDE

SD-stænglerne blev købt som tørrede urter fra Hanherb Co. (Guri, Korea). Plantematerialerne blev taksonomisk bekræftet af Dr. Go-Ya Choi fra Korea Institute of Oriental Medicine (KIOM). En kuponprøve (nummer 2014 SDE-6) blev deponeret i det koreanske herbarium for standard urtemidler. Tørrede SD-stængler (320 g) blev ekstraheret to gange med 70% ethanol (med 2 timers tilbagesvaling), og ekstraktet blev derefter koncentreret under reduceret tryk. Afkogningen blev filtreret, frysetørret og opbevaret ved 4°C. Udbyttet af tørret ekstrakt fra rå udgangsmaterialer var 48,13% (w/w).

 

2.2. Kvantitativ højtydende væskekromatografi (HPLC) analyse

Kromatografisk analyse blev udført med et HPLC-system (Waters Co., Milford, MA, USA) og en fotodiode-array-detektor. Til HPLC-analysen af ​​SDE blev prim-O-glucosylcimifugin-standarden blev købt fra Korea Promotion Institute for Traditional Medicine Industry (Gyeongsan, Korea), ogsek-O-glucosylhamaudol og 4′-O-β-D-glucosyl-5-O1-methylvisaminol blev isoleret i vores laboratorium og identificeret ved spektralanalyser, primært ved NMR og MS.

SDE-prøver (0,1 mg) blev opløst i 70% ethanol (10 ml). Kromatografisk separation blev udført med en XSelect HSS T3 C18-søjle (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA). Den mobile fase bestod af acetonitril (A) og 0,1% eddikesyre i vand (B) med en flowhastighed på 1,0 ml/min. Et flertrinsgradientprogram blev anvendt som følger: 5% A (0 min), 5-20% A (0-10 min), 20% A (10-23 min) og 20-65% A (23-40 min). Detektionsbølgelængden blev scannet ved 210-400 nm og registreret ved 254 nm. Injektionsvolumenet var 10,0μL. Standardopløsninger til bestemmelse af tre kromoner blev fremstillet ved en slutkoncentration på 7,781 mg/ml (primær-O-glucosylcimifugin), 31,125 mg/ml (4′-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisaminol) og 31,125 mg/ml (sek-O-glucosylhamaudol) i methanol og opbevares ved 4°C.

2.3. Evaluering af antiinflammatorisk aktivitetIn vitro

2.3.1. Cellekultur og prøvebehandling

RAW 264.7-celler blev indhentet fra American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) og dyrket i DMEM-medium indeholdende 1% antibiotika og 5,5% FBS. Cellerne blev inkuberet i en befugtet atmosfære med 5% CO2 ved 37°C. For at stimulere cellerne blev mediet erstattet med frisk DMEM-medium og lipopolysaccharid (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) ved 1μg/ml blev tilsat med eller uden SDE (200 eller 400μg/ml) i yderligere 24 timer.

2.3.2. Bestemmelse af nitrogenoxid (NO), prostaglandin E2 (PGE2), tumornekrosefaktor-α(TNF-α), og produktion af interleukin-6 (IL-6)

Celler blev behandlet med SDE og stimuleret med LPS i 24 timer. NO-produktion blev analyseret ved at måle nitrit ved hjælp af Griess-reagenset ifølge et tidligere studie [12Sekretion af de inflammatoriske cytokiner PGE2, TNF-α, og IL-6 blev bestemt ved hjælp af et ELISA-kit (R&D-systemer) i henhold til producentens instruktioner. Virkningerne af SDE på NO- og cytokinproduktion blev bestemt ved 540 nm eller 450 nm ved hjælp af en Wallac EnVision™mikropladelæser (PerkinElmer).

2.4. Evaluering af antiosteoarthritisaktivitetIn Vivo

2.4.1. Dyr

Hanlige Sprague-Dawley-rotter (7 uger gamle) blev købt fra Samtako Inc. (Osan, Korea) og opbevaret under kontrollerede forhold med en 12-timers lys/mørke-cyklus kl.°C og% luftfugtighed. Rotter fik laboratoriefoder og vandfrit valgAlle forsøgsprocedurer blev udført i overensstemmelse med retningslinjerne fra National Institutes of Health (NIH) og godkendt af Animal Care and Use Committee ved Daejeon Universitet (Daejeon, Republikken Korea).

2.4.2. Induktion af OA med MIA hos rotter

Dyrene blev randomiseret og tildelt behandlingsgrupper inden studiets start (pr. gruppe). MIA-opløsning (3 mg/50μL af 0,9% saltvand) blev injiceret direkte i det intraartikulære rum i højre knæ under anæstesi induceret med en blanding af ketamin og xylazin. Rotter blev tilfældigt opdelt i fire grupper: (1) saltvandsgruppen uden MIA-injektion, (2) MIA-gruppen med MIA-injektion, (3) den SDE-behandlede gruppe (200 mg/kg) med MIA-injektion, og (4) den indomethacin- (IM-) behandlede gruppe (2 mg/kg) med MIA-injektion. Rotter fik administreret oralt SDE og IM 1 uge før MIA-injektion i 4 uger. Doseringen af ​​SDE og IM, der blev anvendt i dette studie, var baseret på den, der blev anvendt i tidligere studier [10,13,14].

2.4.3. Målinger af bagpoternes vægtbærende fordeling

Efter OA-induktion blev den oprindelige balance i bagpoternes vægtbærende evne forstyrret. En inkapacitanstester (Linton Instrumentation, Norfolk, UK) blev brugt til at evaluere ændringer i vægtbæringstolerancen. Rotter blev forsigtigt placeret i målekammeret. Den vægtbærende kraft, der blev udøvet af bagbenet, blev gennemsnittet over en periode på 3 sekunder. Vægtfordelingsforholdet blev beregnet ved hjælp af følgende ligning: [vægt på højre bagben/(vægt på højre bagben + vægt på venstre bagben)] × 100 [15].

2.4.4. Målinger af serumcytokinniveauer

Blodprøverne blev centrifugeret ved 1.500 g i 10 minutter ved 4 °C; derefter blev serumet opsamlet og opbevaret ved -70 °C indtil brug. Niveauerne af IL-1β, IL-6, TNF-α, og PGE2 i serum blev målt ved hjælp af ELISA-kits fra R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) i henhold til producentens anvisninger.

2.4.5. Kvantitativ RT-PCR-analyse i realtid

Total RNA blev ekstraheret fra knæledsvæv ved hjælp af TRI-reagenset® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), reverstranskriberet til cDNA og PCR-amplificeret ved hjælp af et TM One Step RT PCR-kit med SYBR green (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Kvantitativ PCR i realtid blev udført ved hjælp af Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR-systemet (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Primersekvenserne og probesekvensen er vist i tabel1Alikvoter af prøve-cDNA'er og en tilsvarende mængde GAPDH-cDNA blev amplificeret med TaqMan® Universal PCR-masterblandingen indeholdende DNA-polymerase i henhold til producentens instruktioner (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). PCR-betingelserne var 2 minutter ved 50 °C, 10 minutter ved 94 °C, 15 sekunder ved 95 °C og 1 minut ved 60 °C i 40 cyklusser. Koncentrationen af ​​målgenet blev bestemt ved hjælp af den sammenlignende Ct-metode (tærskelcyklusnummer ved krydspunkt mellem amplifikationsplot og tærskel) i henhold til producentens instruktioner.

FOB-pris:0,5 USD - 9.999 USD / Stykke

Min. ordremængde:100 stk./stk.

Forsyningsevne:10000 stk./stykker pr. måned