Slidgigt (OA) er en af de langsigtede kroniske degenerative knogleledssygdomme, der rammer den ældre befolkning over 65 år.
1]. Generelt diagnosticeres OA-patienter med beskadiget brusk, betændt synovium og eroderede chondrocytter, som udløser smerte og fysisk lidelse [
2]. Gigtsmerter er hovedsageligt forårsaget af degeneration af brusk i leddene ved betændelse, og når brusken er alvorligt beskadiget kan knogler kollidere med hinanden og forårsage uudholdelige smerter og fysiske vanskeligheder [
3]. Inddragelsen af inflammatoriske mediatorer med symptomer som smerte, hævelse og stivhed i leddet er veldokumenteret. Hos OA-patienter findes inflammatoriske cytokiner, som forårsager erosion af brusk og subchondral knogle i ledvæsken [
4]. To store klager, som OA-patienter generelt har, er smerter og synovial betændelse. Derfor er de primære mål for de nuværende OA-terapier at mindske smerter og inflammation. [
5]. Selvom de tilgængelige OA-behandlinger, herunder ikke-steroide og steroide lægemidler, har dokumenteret effektivitet til at lindre smerte og betændelse, har langvarig brug af disse lægemidler alvorlige sundhedsmæssige konsekvenser såsom kardiovaskulære, gastrointestinale og nyredysfunktioner [
6]. Der skal således udvikles en mere effektiv medicin med færre bivirkninger til behandling af slidgigt.
Naturlige sundhedsprodukter bliver mere og mere populære for at være sikre og let tilgængelige [
7]. Traditionel koreansk medicin har dokumenteret virkning mod flere inflammatoriske sygdomme, herunder gigt [
8]. Aucklandia lappa DC. er kendt for sine medicinske egenskaber, såsom at forbedre cirkulationen af qi for at lindre smerter og berolige maven, og er traditionelt blevet brugt som et naturligt smertestillende middel.
9]. Tidligere rapporter tyder på, at A. lappa har anti-inflammatorisk [
10,
11], smertestillende [
12], mod kræft [
13], og mavebeskyttende [
14] effekter. De forskellige biologiske aktiviteter af A. lappa er forårsaget af dets vigtigste aktive forbindelser: costunolide, dehydrocostus lacton, dihydrocostunolide, costuslacton, α-costol, saussurea lacton og costuslacton [
15]. Tidligere undersøgelser hævder, at costunolide viste anti-inflammatoriske egenskaber i lipopolysaccharid (LPS), som inducerede makrofagerne gennem reguleringen af NF-kB og varmechokproteinvejen [
16,
17]. Ingen undersøgelse har imidlertid undersøgt de potentielle aktiviteter af A. lappa til OA-behandling. Den nuværende forskning har undersøgt de terapeutiske virkninger af A. lappa mod OA ved hjælp af (mononatrium-iodacetat) MIA og eddikesyre-inducerede gnavermodeller.
Mononatrium-iodacetat (MIA) er berømt brugt til at producere meget af smerteadfærden og de patofysiologiske træk ved OA hos dyr [
18,
19,
20]. Når det injiceres i knæled, forstyrrer MIA chondrocytmetabolismen og fremkalder inflammation og inflammatoriske symptomer, såsom brusk og subchondral knogleerosion, de kardinalsymptomer på OA [
18]. Vridningsrespons induceret med eddikesyre betragtes bredt som simulering af perifer smerte hos dyr, hvor den inflammatoriske smerte kan måles kvantitativt [
19]. Musemakrofagcellelinjen, RAW264.7, bruges populært til at studere cellulære reaktioner på inflammation. Ved aktivering med LPS aktiverer RAW264 makrofager inflammatoriske veje og udskiller adskillige inflammatoriske mellemled, såsom TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS og IL-6 [
20]. Denne undersøgelse har evalueret de anti-nociceptive og antiinflammatoriske virkninger af A. lappa mod OA i MIA-dyremodel, eddikesyre-induceret dyremodel og LPS-aktiverede RAW264.7-celler.
2. Materialer og metoder
2.1. Plantemateriale
Den tørrede rod af A. lappa DC. anvendt i eksperimentet blev anskaffet fra Epulip Pharmaceutical Co., Ltd., (Seoul, Korea). Det blev identificeret af prof. Donghun Lee, afdeling for urtefarmakologi, oberst i Korean Medicine, Gachon University, og voucher-prøvenummeret blev deponeret som 18060301.
2.2. HPLC-analyse af A. lappa-ekstrakt
A. lappa blev ekstraheret under anvendelse af et tilbagesvalingsapparat (destilleret vand, 3 timer ved 100 °C). Den ekstraherede opløsning blev filtreret og kondenseret under anvendelse af en lavtryksfordamper. A. lappa-ekstrakt havde et udbytte på 44,69% efter frysetørring under -80 °C. Kromatografisk analyse af A. lappa blev udført med en HPLC forbundet med et 1260 InfinityⅡ HPLC-system (Agilent, Pal Alto, CA, USA). Til kromatisk adskillelse blev EclipseXDB C18-søjle (4,6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) brugt ved 35 °C. I alt 100 mg af prøven blev fortyndet i 10 ml 50 % methanol og sonikeret i 10 minutter. Prøver blev filtreret med et sprøjtefilter (Waters Corp., Milford, MA, USA) på 0,45 μm. Sammensætningen af den mobile fase var 0,1 % phosphorsyre (A) og acetonitril (B), og søjlen blev elueret som følger: 0-60 min, 0 %; 60–65 min., 100 %; 65–67 min., 100 %; 67–72 min., 0 % opløsningsmiddel B med en flowhastighed på 1,0 ml/min. Spildevandet blev observeret ved 210 nm under anvendelse af et injektionsvolumen på 10 μL. Analysen blev udført i tre eksemplarer.
2.3. Dyreopstaldning og -drift
Sprague-Dawley (SD) hanrotter i alderen 5 uger og ICR hanmus i alderen 6 uger blev købt fra Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Korea). Dyrene blev holdt i et rum under anvendelse af konstant temperatur (22 ± 2 °C) og fugtighed (55 ± 10%) og en lys/mørke-cyklus på 12/12 timer. Dyrene var bekendt med tilstanden i mere end en uge før forsøget startede. Dyr havde en ad libitum forsyning af foder og vand. De nuværende etiske regler for dyrepleje og håndtering på Gachon University (GIACUC-R2019003) blev strengt fulgt i alle dyreforsøgsprocedurer. Undersøgelsen var designet til efterforsker-blindet og parallelt forsøg. Vi fulgte eutanasimetoden i henhold til retningslinjerne fra Den Dyreforsøgsetiske Komité.
2.4. MIA injektion og behandling
Rotter blev tilfældigt adskilt i 4 grupper, nemlig sham, kontrol, indomethacin og A. lappa. Da rotterne blev bedøvet med 2% isofluoran O2-blanding, blev de injiceret under anvendelse af 50 μL MIA (40 mg/m; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) intraartikulært i knæleddene for at føre til eksperimentel OA. Behandlingerne blev udført som nedenfor: kontrol- og falske grupper blev kun opretholdt med AIN-93G basisdiæt. Kun indomethacingruppen blev forsynet med indomethacin (3 mg/kg) inkorporeret i AIN-93G diæt, og A. lappa 300 mg/kg gruppen blev tildelt AIN-93G diæt suppleret med A. lappa (300 mg/kg). Behandlingerne blev fortsat i 24 dage siden dagen for OA-induktion med en hastighed på 15-17 g pr. 190-210 g kropsvægt på daglig basis.
2.5. Vægtbærende måling
Efter OA-induktion blev vægtbærende kapacitetsmåling af baglemmer af rotterne udført med incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, USA) som planlagt. Vægtfordelingen på bagbenene blev beregnet: vægtbærende kapacitet (%)
