Slidgigt (OA) er en af de langvarige kroniske degenerative knogle- og ledsygdomme, der rammer den ældre befolkning over 65 år [
1Generelt diagnosticeres OA-patienter med beskadiget brusk, betændt synovium og eroderede kondrocytter, hvilket udløser smerte og fysisk ubehag [
2]. Gigtsmerter skyldes overvejende degeneration af brusk i leddene på grund af betændelse, og når brusken er alvorligt beskadiget, kan knogler støde sammen og forårsage uudholdelig smerte og fysisk belastning [
3]. Inddragelsen af inflammatoriske mediatorer med symptomer som smerter, hævelse og stivhed i leddet er veldokumenteret. Hos patienter med artrose findes inflammatoriske cytokiner, som forårsager erosion af brusk og subkondral knogle, i synovialvæsken [
4To væsentlige klager, som patienter med artrose generelt har, er smerter og synovial inflammation. Derfor er de primære mål med de nuværende artrosebehandlinger at mindske smerter og inflammation. [
5Selvom de tilgængelige behandlinger for artrose, herunder ikke-steroide og steroide lægemidler, har vist sig effektive til at lindre smerter og inflammation, har langvarig brug af disse lægemidler alvorlige helbredsmæssige konsekvenser, såsom kardiovaskulære, gastrointestinale og nyredysfunktioner [
6Derfor skal der udvikles en mere effektiv medicin med færre bivirkninger til behandling af slidgigt.
Naturlige sundhedsprodukter bliver mere og mere populære, fordi de er sikre og let tilgængelige [
7Traditionel koreansk medicin har dokumenteret effekt mod adskillige inflammatoriske sygdomme, herunder gigt [
8Aucklandia lappa DC. er kendt for sine medicinske egenskaber, såsom at forbedre cirkulation af qi for at lindre smerter og berolige maven, og er traditionelt blevet brugt som et naturligt smertestillende middel [
9Tidligere rapporter tyder på, at A. lappa besidder antiinflammatoriske [
10,
11], smertestillende [
12], kræftbekæmpende [
13], og gastrobeskyttende [
14] effekter. De forskellige biologiske aktiviteter hos A. lappa er forårsaget af dens vigtigste aktive forbindelser: costunolid, dehydrocostuslacton, dihydrocostunolid, costuslacton, α-costol, saussurea-lacton og costuslacton [
15Tidligere undersøgelser hævder, at costunolid udviste antiinflammatoriske egenskaber i lipopolysaccharid (LPS), som inducerede makrofagerne gennem regulering af NF-kB og varmechokproteinvejen [
16,
17Der er dog ingen undersøgelser, der har undersøgt de potentielle aktiviteter af A. lappa til behandling af artrose. Den foreliggende forskning har undersøgt de terapeutiske virkninger af A. lappa mod artrose ved hjælp af (mononatriumiodacetat) MIA og eddikesyre-inducerede gnavermodeller.
Mononatriumiodacetat (MIA) er kendt for at fremkalde mange af smerteadfærdene og de patofysiologiske træk ved artrose hos dyr [
18,
19,
20Når MIA injiceres i knæleddene, forstyrrer det kondrocytmetabolismen og inducerer inflammation og inflammatoriske symptomer, såsom brusk- og subkondral knogleerosion, de kardinale symptomer på artrose [
18Vridningsrespons induceret med eddikesyre betragtes bredt som simulering af perifer smerte hos dyr, hvor den inflammatoriske smerte kan måles kvantitativt [
19]. Musemakrofagcellelinjen, RAW264.7, bruges i vid udstrækning til at studere de cellulære reaktioner på inflammation. Ved aktivering med LPS aktiverer RAW264-makrofager inflammatoriske veje og udskiller adskillige inflammatoriske mellemled, såsom TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS og IL-6 [
20Dette studie har evalueret de antinociceptive og antiinflammatoriske virkninger af A. lappa mod OA i MIA-dyremodel, eddikesyre-induceret dyremodel og LPS-aktiverede RAW264.7-celler.
2. Materialer og metoder
2.1. Plantemateriale
Den tørrede rod af A. lappa DC, der blev brugt i eksperimentet, blev indkøbt fra Epulip Pharmaceutical Co., Ltd. (Seoul, Korea). Den blev identificeret af professor Donghun Lee, Institut for Urtefarmakologi, Kol. for Koreansk Medicin, Gachon Universitet, og kuponprøvenummeret blev deponeret som 18060301.
2.2. HPLC-analyse af A. lappa-ekstrakt
A. lappa blev ekstraheret ved hjælp af et refluksapparat (destilleret vand, 3 timer ved 100 °C). Den ekstraherede opløsning blev filtreret og kondenseret ved hjælp af en lavtryksfordamper. A. lappa-ekstrakt havde et udbytte på 44,69% efter frysetørring under -80 °C. Kromatografisk analyse af A. lappa blev udført med en HPLC tilsluttet ved hjælp af et 1260 InfinityⅡ HPLC-system (Agilent, Pal Alto, CA, USA). Til kromatisk separation blev EclipseXDB C18-søjle (4,6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) anvendt ved 35 °C. I alt 100 mg af prøven blev fortyndet i 10 ml 50% methanol og sonikeret i 10 minutter. Prøverne blev filtreret med et sprøjtefilter (Waters Corp., Milford, MA, USA) på 0,45 μm. Den mobile fases sammensætning var 0,1% fosforsyre (A) og acetonitril (B), og søjlen blev elueret som følger: 0-60 min, 0%; 60-65 min, 100%; 65-67 min, 100%; 67-72 min, 0% opløsningsmiddel B med en flowhastighed på 1,0 ml/min. Effluenten blev observeret ved 210 nm ved anvendelse af et injektionsvolumen på 10 μL. Analysen blev udført i triplikat.
2.3. Dyreopstaldning og -styring
Hanlige Sprague-Dawley (SD) rotter på 5 uger og hanlige ICR-mus på 6 uger blev købt fra Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Korea). Dyrene blev holdt i et rum med konstant temperatur (22 ± 2 °C) og luftfugtighed (55 ± 10%) og en lys/mørke-cyklus på 12/12 timer. Dyrene blev fortrolige med forholdene i mere end en uge, før eksperimentet startede. Dyrene fik adgang til foder og vand ad libitum. De gældende etiske regler for dyrepleje og -håndtering på Gachon Universitet (GIACUC-R2019003) blev nøje fulgt i alle dyreforsøgsprocedurer. Undersøgelsen var designet som et investigator-blindet og parallelt forsøg. Vi fulgte aflivningsmetoden i henhold til retningslinjerne fra den etiske komité for dyreforsøg.
2.4. MIA-injektion og -behandling
Rotter blev tilfældigt opdelt i 4 grupper, nemlig simuleret rotteforsøg, kontrolrotor, indomethacin og A. lappa. Rotterne blev bedøvet med en 2% isofluoran O2-blanding og injiceret intraartikulært i knæleddene med 50 μL MIA (40 mg/m²; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) for at frembringe eksperimentel artrose. Behandlingerne blev udført som følger: Kontrol- og simuleret rottegrupper fik kun AIN-93G basisdiæt. Kun indomethacingruppen fik indomethacin (3 mg/kg) inkorporeret i AIN-93G-diæten, og A. lappa 300 mg/kg-gruppen blev tildelt AIN-93G-diæt suppleret med A. lappa (300 mg/kg). Behandlingerne blev fortsat i 24 dage fra dagen for artroseinduktion med en hastighed på 15-17 g pr. 190-210 g kropsvægt dagligt.
2.5. Måling af vægtbæring
Efter OA-induktion blev vægtbæreevnemåling af rotternes baglemmer udført med incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, USA) som planlagt. Vægtfordelingen på baglemmerne blev beregnet: vægtbæreevne (%)
